Ti-mô-thê là một anh trẻ trong hội thánh ở Lít-trơ. Cha anh là người Hy Lạp, còn mẹ là người Do Thái. Từ khi Ti-mô-thê còn nhỏ, mẹ anh là Ơ-nít và bà ngoại là Lô-ít đã dạy dỗ anh về Đức Giê-hô-va.

Khi đến thăm Lít-trơ trong chuyến hành trình truyền giáo thứ hai, Phao-lô thấy Ti-mô-thê thật sự yêu thương anh em và sẵn sàng giúp đỡ họ. Thế nên, Phao-lô mời Ti-mô-thê tham gia chuyến hành trình cùng ông. Qua thời gian, Phao-lô đã huấn luyện Ti-mô-thê trở thành người rao giảng và dạy dỗ giỏi.

Thần khí thánh hướng dẫn Phao-lô và Ti-mô-thê ở bất cứ nơi nào họ đi. Đêm nọ, trong một khải tượng, có người đàn ông bảo Phao-lô đến Ma-xê-đô-ni-a để giúp họ. Thế là Phao-lô, Ti-mô-thê, Si-la và Lu-ca đến đó rao giảng và thành lập các hội thánh.

Tại thành phố Tê-sa-lô-ni-ca của xứ Ma-xê-đô-ni-a, nhiều người nam và nữ đã trở thành tín đồ đạo Đấng Ki-tô. Nhưng một số người Do Thái ganh ghét Phao-lô và các bạn đồng hành, nên đã tập hợp một đám đông và giải một số anh em đến các nhà cầm quyền. Đám đông la lên: ‘Những tên này chống lại chính quyền La Mã!’. Mạng sống của Phao-lô và Ti-mô-thê bị đe dọa, thế nên trong đêm đó, họ chạy đến Bê-rê.

Người dân Bê-rê sốt sắng học tin mừng, cả người Hy Lạp lẫn người Do Thái ở đó đều trở thành người tin đạo. Nhưng khi một số người Do Thái từ Tê-sa-lô-ni-ca đến gây khó khăn, Phao-lô rời khỏi đó để đến A-thên. Ti-mô-thê và Si-la ở lại Bê-rê để củng cố các anh em. Một thời gian sau, Phao-lô phái Ti-mô-thê trở lại Tê-sa-lô-ni-ca để giúp anh em đối phó với sự bắt bớ dữ dội. Sau đó, Phao-lô phái Ti-mô-thê đến thăm nhiều hội thánh khác và khích lệ họ.

 Phao-lô nói với Ti-mô-thê: ‘Những ai muốn phụng sự Đức Giê-hô-va sẽ bị ngược đãi’. Ti-mô-thê đã bị ngược đãi và phải ngồi tù vì đức tin. Anh vui mừng vì có cơ hội chứng minh lòng trung thành với Đức Giê-hô-va.

Phao-lô nói với các anh em ở Phi-líp: ‘Tôi phái Ti-mô-thê đến với anh em. Anh ấy sẽ dạy anh em cách bước theo chân lý và huấn luyện anh em trong thánh chức’. Phao-lô biết ông có thể tin tưởng Ti-mô-thê. Họ đã cùng làm việc như những người bạn và cộng sự trong nhiều năm.